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BIOREADER® 7000 -F
Fluoro Elispot / Plaque + Enzymatik-Readern für 96-Well-Platten mit innovativer Power-LED Fluoro-Anregung.
Mit dem BIOREADER® 7000 -F kann enzymatisches Elispot/Plaque Assay oder Fluorospot gezählt und verifiziert werden.
Er ist mit einer langlebigen LED-Fluoreszenzlichtquelle ausgestattet. Auf diese Weise können Sie verifizierte enzymatische Elispot- oder Fluorospot-Messungen auswerten.
Beim BIOREADER® 7000 -F können maximal 10 Standard Olympus® Fluoro-Filtermodule automatisch appliziert werden.
Modelvarianten:
Fluoro-Filtermodule installiert Max. Filtermodule möglich
Alpha 2 6
Beta 3 6
Gamma 4 10
Delta 6 10
Der Delta hat eine zusätzliche UV LED-Lichtquelle für DAPI-Filter.
Der Filterwechsler des Bioreader® 7000 -F ist modular aufgebaut und kann vor Ort um ndere oder weitere Filtercubes umgebaut werden.
Unabängigkeit
Der Bioreader® und EazyReader® arbeitet mit allen gängigen Elispot-, Fluorospot-, Plaque-, Fluoro-Plaque- und CFU-Assays.
Sie können frei unter allen großen Assay-Herstellern wählen.
- 6- oder 10-facher Fluoro-Filterwechsler: Für Standard Olympus Filtermodule bei allen Bioreader® 7000 -F Modellen.
- Neue hochempfindliche, aber rauscharme Kameratechnologie mit optimaler Objektivlinsen für kontrastreiche Bilder.
- Filter-Upgradeoptionen: Von Modell Alpha bis auf Delta (maximal 10 Filtermodule)
- 3D / Spot-Volumen Cytokin-Quantifizierung: Bietet empfindlichere Ergebnisse der Stimulationsantwort.
- Bioreader® 7000 -F ist ein erschwingliches Modell für fluoreszierende und enzymatische Elispot und Plaque/FOCI-Platten in 384/96 Wells.
- Duale telezentrische Beleuchtung.
- Das Zählen ist in Bezug auf die Positionierung wesentlich schneller und präziser.
- Frontlader, automatische Tür.
- Lautsprecher und interaktives Trainingsprogramm.
- Exportfunktionen für Excel / Word / Power Point und LIMS.
- Geeignet für Forschungszwecke.
- Kamera-Upgrade zu 6 - 41 MPixel erhältlich.
- Optionale Vollautomatisierung mit 'Plattenfüllsystem'.
- DQ/OQ/OQ/PQ Dokumentation möglich.
- 12 Monate Garantie.
- EU-Komformitätserklärung und EMV-Zertifikat.
- Die innovative Bioreader® und EazyReader® Software kombiniert eine einfache Bedienung mit Vielseitigkeit und Flexibilität.
- Scan, Analyse und Überlagerung in Echtzeit.
- Erzeugung von bis zu 7 Bildern pro Scanvorgang.
- Mithilfe der 'Profiling' App können benutzerunabhängige Messprotokolle für Elispot-Anfänger und Referenzen für Experten erstellt werden.
- Verifiziert in kollaborativen Studien.
- Exportoptionen und Reports mit allen skalierbaren Bildern und Ergebnissen, auch in einer Datei.
- Kundenspezifische Export- und Reportvorlagen.
- Videoclips und inhaltsspezifische Hilfedateien.
- Qualifizierte Installation und begleitendes Training mit jedem Gerät.
- Vor-Ort- oder auch Internet-Services und -Support möglich.
- Klassifizierte Messprotokolle, Speicherung der Arbeitsverlaufes, Vergleichswerkzeuges.
- Benutzerspezifische Platten, Studien/Projekte, Platten-Layouts bzw. -Designs und Messprotokolle verhindern Verwechslungen.
- Genauere Zytokin-Quantifizierung basierend auf dem patentierten photometrischen dualen Beleuchtungssystem.
- Optionale Software Features:
- "Routine" Software-Paket: Optimierte Benutzeroberfläche für häufig verwendete Vorgänge und zeigt nur die Symbole an, welche Sie für entsprechende Tätigkeiten benötigen, schnelles Einlesen der Platten und schnelle Übersicht, Q.K. und Freigabe der Ergebnisse.
- 21 CFR part 11 basiertes Software-Modul.
Größe
Gewicht
Fluorospot 1-4 Farben
Multi-Farben/-Fluoreszenz Reader,
am besten geeignet für Elispot und FluoroSpot
Durch die Anwendung der 'local background compensation' gelingt es, die Zytokin Sekretion unabhängig vom lokalen Hintergrund zu quantifizieren.
Warum Fluorospot?
Enzymatische Elispot Färbung
• Erlaubt die Auswertung von 1-2 Zytokinen simultan.
• Falls Sie jedoch an doppel-sekretieren Zellen interessiert sind, so ist eine Interpretation sehr schwierig, da Zellen welche nahe beieinanderliegen überlappen könne und die Mischfarbe (Violett, Purple) nicht immer eindeutig auftritt.
Fluoro-Färbung
Erlaubt es -eine theoretische unbegrenzte Anzahl von- Zytokinen zu quantifizieren, da für jedes Zytokin ein eignes Bild pro Well zur Verfügung steht.. eines nach dem anderen...
Darum ist die Entscheidung ob es sich um eine doppelt sekretierende Zelle handelt einfach. Lokale Hintergrundkompensation und 'Offset Kompensation' sorgt für sichere Trennung von nahen beieinander liegenden Spots.
Darüber hinaus ist die Signal Intensität direkt proportional zu dem Analy /Zelle. Eine genauere Quantifizierung des sekretierten Zytokine -im Vergleich zu der enzymatischen Methode- ist damit möglich.
Elispot in 384 Mikrofilter-Platten
Kleineres Volume, dadurch ist ein höherer Durchsatz möglich.
Elispot - eine enzymatisch Farbe
blaues, rotes, grünes oder silbernes Elispot Substrat.
Nachweis von Antikörper. Das Substrat wirkt enzymkonjugierend und beschleunigend.
"Der Elispot Assay dient zum Nachweis sezernierter Zytokine oder Antikörper, die von einzelnen Immunzellen nach Stimulation mit Antigenen sezerniert und an einer Membran immobilisiert werden." [https://de.wikipedia.org/wiki/ELISpot]
Why Elispot?
The cytokine Elispot assay is designed to enumerate cytokine secreting cells in single cell suspensions of lymphoid tissue, CNS tissue, bone marrow or preparations of peripheral blood mononuclear cells (PBMC).
The assay has the advantage of detecting only activated/memory T cells and the cytokine release can be detected at the single cell level, allowing direct determination of T cell frequencies.
The ELISPOT assay is an effective tool to enumerate antigen-specific T cells in the circulation of immunized humans and animals at much lower frequencies than possible with other currently available methods.
The ELISPOT assay has proven to be a sensitive and unique system to follow disease progression in human individuals or animals. Several studies have indicated that alterations in the frequency of cytokine pc in different compartments of the body adequately reflect changes in immune function.
The ELISPOT assay may be used to determine effects of drugs, chemicals or other compounds on cytokine secretion in vitro, thereby providing data on their putative modulatory effects on immune function in vivo
The ELISPOT assay is currently being used increasingly for the quantitative assessment of peptide reactive T lymphocytes from PBMC in infectious disease (3, 9) or in the course of vaccination trials aimed at the induction of tumor-specific T cells in patients with cancer.
Elispot may be used for Diagnosis of genetic defects,Allergic diseases,Autoimmune diseases,Transplantation,Cancer research,Acute inflammation,Acute infectious diseases and septic shock.
Elispot - 2 enzymatische Farben
blaue und rote Elispot Substrate (Mischfarbe violett)
Duale sezernierte Zytokine oder Antikörper
RFP-exprimierte Virusinfektion
"Mithilfe der DNA-Rekombinationstechnologie wird ein RFP-Gen mit einem anderen Gen kombiniert, wodurch ein Protein gebildet wird. Dieser Komplex wird anschließend in einer Zelle eingefügt."
[https://embryo.asu.edu/pages/green-fluorescent-protein jedoch mit RFP anstelle von GFP]
Alveoläre Epithelzellen (AEZ)
"Typischerweise sind Typ 1- Alveolarzellen - die Hauptgasaustauschfläche der Alveole und sind ein wesentlicher Bestandteil der Aufrechterhaltung der Permeabilitätssperrfunktion der Alveolarmembran. Typ 2 -Pneumozyten - sind die Vorläufer von Typ 1-Zellen und sind für die Tensidproduktion und die Homöostase verantwortlich."
[https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/alveolar-type-i-cells]
Das Alveolarepithel tritt bei toxischen Lungenexpositionen auf, da es dabei strukturell empfindlich ist und sich in der Nähe von inhalierten Giftstoffen befindet. Epithelzellen vom Typ 2 sind wichtig für die Aufrechterhaltung der Integrität des Alveolarepithels und der normalen Lungenfunktion.
Ungefärbte Zellen
AEZ Graustufen
"Typischerweise sind Typ 1 - Alveolarzellen - die Hauptgasaustauschfläche der Alveole und sind ein wesentlicher Bestandteil der Aufrechterhaltung der Permeabilitätssperrfunktion der Alveolarmembran. Typ 2 - Pneumozyten - sind die Vorläufer von Typ 1-Zellen und sind für die Tensidproduktion und die Homöostase verantwortlich."
[https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/alveolar-type-i-cells]
Das Alveolarepithel tritt bei toxischen Lungenexpositionen auf, da es dabei strukturell empfindlich ist und sich in der Nähe von inhalierten Giftstoffen befindet. Epithelzellen vom Typ 2 sind wichtig für die Aufrechterhaltung der Integrität des Alveolarepithels und der normalen Lungenfunktion.
MCMV (Maus-Cytomegalovirus) grüne Fluor-Remission
"Die Gattung Cytomegalovirus (auch Zytomegalievirus) umfasst derzeit sechs klassifizierte Virusspezies aus der Familie Herpesviridae." [https://de.wikipedia.org/wiki/Cytomegalovirus]
MCMV (Maus Cytomegalovirus) rote Fluor-Remission
"Die Gattung Cytomegalovirus (auch Zytomegalievirus) umfasst derzeit sechs klassifizierte Virusspezies aus der Familie Herpesviridae." [https://de.wikipedia.org/wiki/Cytomegalovirus]
MCMV (Maus Cytomegalovirus) ungefärbt
MCMV-Mutationen
Es wurden MCMV-Mutantionen erzeugt, welche mit tdTomato, eGFP oder mCherry exprimieren.
HCMV (Menschlicher Cytomegalovirus): ungefärbt
"Das Glykoprotein gO (UL74) des humanen Cytomegalovirus (HCMV) bildet einen Komplex mit gH / gL. Virusmutanten mit einer Löschung von gO zeigen einen Defekt in der sekundären Hülle mit der Folge, dass die Virusausbreitung auf einen zellassoziierten Weg beschränkt ist"
GFP-Immunfluoreszenz auf HEK 293-Zellen
"HEK-Zellen ist die abgekürzte Bezeichnung für "Human Embryonic Kidney"-Zellen, (menschliche embryonale Nierenzellen). Diese Zelllinie wird auch als HEK-293 oder 293-Zellen bezeichnet. HEK-Zellen werden in der Zellbiologie seit vielen Jahren als vergleichsweise einfach zu handhabende Zelllinie eingesetzt."
NK92 Zellen: natürliche Killerzellen (menschliche Zelllinie) exptimieren grün fluoreszierendes Protein (gfp)
"NK-Zellen (natürliche Killerzellen) gehören zu den Lymphozyten (Untergruppe der weißen Blutzellen oder Leukozyten). Sie sind in der Lage, abnormale Zellen wie Tumorzellen und virusinfizierte Zellen zu erkennen und abzutöten. NK-Zellen besitzen keine Antigen-spezifischen Rezeptoren und gehören zum angeborenen Immunsystem. Gesunde Menschen haben einen Anteil von 5–15 % NK-Zellen an peripheren mononuklearen Blutzellen."
NK92 Zellen: natürliche Killerzellen (menschliche Zelllinie) gleiche Proben in Mikrowell-Platten
"NK-Zellen (natürliche Killerzellen) gehören zu den Lymphozyten (Untergruppe der weißen Blutzellen oder Leukozyten). Sie sind in der Lage, abnormale Zellen wie Tumorzellen und virusinfizierte Zellen zu erkennen und abzutöten. NK-Zellen besitzen keine Antigen-spezifischen Rezeptoren und gehören zum angeborenen Immunsystem. Gesunde Menschen haben einen Anteil von 5–15 % NK-Zellen an peripheren mononuklearen Blutzellen."
Maus-Milzzellen, hauptsächlich Lymphozyten, die mit FITC-konjugierter Anti-Maus-CD45-Färbung angefärbt wurden
"Die Milz ist ein Organ, das in nahezu allen Wirbeltieren vorkommt. Ähnlich wie ein großer Lymphknoten wirkt er vor allem als Blutfilter. Eine 2009 veröffentlichte Studie an Mäusen ergab, dass das rote Fruchtfleisch der Milz ein Reservoir bildet, das mehr als die Hälfte der körpereigenen Monozyten enthält." [https://de.wikipedia.org/wiki/Milz]
Foci Assay: Gesamtansicht der Well-Platte
"Der Focus-Forming-Assay (FFA) ist eine Variation des Plaque-Assays, jedoch mit Fokus auf der Verwendung von FFA Immunfärbungstechniken mit fluoreszenzmarkierten Antikörper, die für ein virales Antigen spezifisch sind, um infizierte Wirtszellen und infektiöse Viruspartikel zu erkennen, bevor ein tatsächlicher Plaque gebildet wird."
Foci Assay: Sehr hoher Schärfegrad
"Der Focus-Forming-Assay (FFA) ist eine Variation des Plaque-Assays, jedoch mit Fokus auf der Verwendung von FFA Immunfärbungstechniken mit fluoreszenzmarkierten Antikörper, die für ein virales Antigen spezifisch sind, um infizierte Wirtszellen und infektiöse Viruspartikel zu erkennen, bevor ein tatsächlicher Plaque gebildet wird."
GFP/DAPI-exprmierte Virusinfektion
"Mithilfe der DNA-Rekombinationstechnologie wird ein RFP-Gen mit einem anderen Gen kombiniert, wodurch ein Protein gebildet wird. Dieser Komplex wird anschließend in einer Zelle eingefügt."
Siehe: [https://embryo.asu.edu/pages/green-fluorescent-protein]
Neutralisationstest
"Der Neutralisationstest ist eine Variante des Plaque-Assays, mit dem neutralisierende Antikörper gegen bestimmte Viren im Serum eines Patienten oder eines Impflings nachgewiesen werden können. Durch die Bindung von Antikörper an die Oberfläche des Virus wird seine Aufnahme in die Zelle verhindert, sodass es zu keiner Vermehrung mehr kommen kann und die Anzahl an Plaques in einer Zellkultur reduziert wird. Daher bezeichnet man den Neutralisationstest auch als Plaque-Reduktions-Assay."
TCID50 Virus-Assay
Die Zellen wurden infiziert und mit einer Schicht bedeckt. Mit CV gefärbte Zellen überleben. Unbedeckte Zellen werden vom Virus abgetötet.
Plaque-Assay: Extrem große Bereiche
"Die TCID50 (Median Tissue Culture Infectious Dose) ist eine Methode zur Überprüfung des Virustiters. TCID50 bezeichnet die Konzentration, bei der 50% der Zellen infiziert sind während ein Teströhrchen oder eine Vertiefungsplatte - auf der Zellen kultiviert wurden - mit einer verdünnten Lösung von Virusflüssigkeit hinzugegeben werden."
CV Plaque-Assay: Beispiel mit großen und unscharfen Plaques
Die Zellen wurden infiziert und mit einer Schicht bedeckt. Mit CV gefärbte Zellen überleben. Unbedeckte Zellen werden vom Virus abgetötet.
Plaque-Assay: Sehr helle Plaques in 24 Well-Platte
Die Zellen wurden infiziert und mit einer Schicht bedeckt. Mit CV gefärbte Zellen überleben. Unbedeckte Zellen werden vom Virus abgetötet.
Organoide
"Ein Organoid ist eine wenige Millimeter große, organähnliche Mikrostruktur, die mit Methoden der Zellkultur artifiziell erzeugt werden kann. Unter geeigneten Kulturbedingungen können Organoide aus einer oder wenigen Gewebezellen, embryonalen Stammzellen oder induzierten pluripotenten Stammzellen gezüchtet werden. Sofern keine mesenchymalen Stammzellen verwendet wurden, besitzen Organoide kein Stroma und keinerlei Gefäße. Sie zeigen dennoch physiologisch relevante, organähnliche Eigenschaften."
2-fach gentechnisch veränderte Organismen
Transgen:
"Ein DNA-Segment, das einem anderen Organismus zugeführt wurde."
Siehe: [https://de.wikipedia.org/wiki/Gentechnisch_ver%C3%A4nderter_Organismus]
